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茚三酮法原理

茚三酮法是一種化學反應,其原理如下:

在加熱條件和弱酸性環境下,胺基酸或肽與茚三酮反應,生成具有特殊顏色的化合物。大多數胺基酸反應後生成藍紫色物質,天冬氨酸生成棕色物質,而脯氨酸或羥脯氨酸則生成黃色物質。

反應過程中,胺基酸首先被氧化分解,釋放出氨和二氧化碳,胺基酸轉化為醛。隨後,水合茚三酮轉化為還原型茚三酮。在弱酸性溶液中,還原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮發生縮合反應,生成藍紫色物質。

脯氨酸和羥脯氨酸與其他胺基酸不同,因為它們的α-氨基被取代,因此與茚三酮反應產生黃色物質。

該反應非常靈敏,可以通過在570nm波長下進行比色,根據反應生成的藍紫色的深淺來測定樣品中胺基酸的含量。這種方法在一定濃度範圍內,顯色溶液的吸光率與胺基酸的含量成正比,因此也可以用於分離胺基酸時的顯色劑,對胺基酸進行定性或定量分析。

茚三酮作為檢測α-胺基酸與多肽的常用顯色劑,其與α-胺基酸反應產生的藍、紫或紫紅色產物極為特異,因此也可用作胺基酸色譜分析的顯色劑。

綜上所述,茚三酮法通過其獨特的顏色反應和靈敏度,廣泛套用於食品、法醫、臨床診斷等領域中胺基酸和蛋白質的定性或定量檢測。